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操作流程：(1)产品仅用于科研待测样品孔中每孔加入待测样品100μl，每种样品设3个平行孔；设两个阴性对照孔，每孔加未处理组的细胞裂解液100μl；另设一个空白对照孔，加入纯细胞裂解液100μl。
(2)酶标板置4℃，包被过夜。
(3)洗板：吸干孔内反应液，用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后，即甩去)，之后将洗涤液注满板孔，浸泡1-2分钟，间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
(4)阴性对照孔每孔加入PBS 50μl，样品孔及空白孔每孔加入1：500稀释的工作液50μl。
(5)酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。
(6)洗板，同(4)。
(7)每孔加1：5000稀释的HRP-标记的工作液100μl。
(8)酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。
(9)洗板，同(4)。
(10)每孔加TMB显色液100μl，轻轻混匀10s，置37℃暗处反应15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。
(12)分别测450nm吸光值W1和630nm吸光值W2，z终测得的OD值为两者之差(W1-W2)，以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
(13)数据处理：在得出标本(S)和阴性对照(N)的OD值后，计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。
大鼠鞘磷脂(SM)ELISA试剂盒的使用常识：
（1）试剂切忌与手接触（有些试剂有强腐蚀性、等特性）。
（2）要用洁净的药勺，量筒或滴管取用试剂，绝不允许用同一种工具同时连续取用多种试剂。取完一种试剂后，应将工具洗净（药勺要擦干）后，才可取用另一种试剂。
（3）试剂取用后一定要将瓶塞盖紧，不可放错瓶盖和滴管，绝不允许张冠李戴，用完后请及时将瓶放回原处，以免遗忘，带来不便。
（4）已取出的试剂不能再放回原试剂瓶内（怕产生原试剂的再次污染）。
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