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离子交换层析填料具有良好的物理化学稳定性,介质表面经特殊处理,具有更好的亲水性,很大程度地避免了与生物类样品的非特异性吸附。此介质通过专有的表面修饰技术,在亲水性基质表面键合不同的离子交换官能团得到强阳离子交换(SP)、强阴离子交换(Q)、弱阳离子交换(CM)、弱阴离子交换(DEAE)四种层析介质,并确保了表面离子交换层的高密度和均一性。MoSphereIEX层析介质广泛适用于抗体、疫苗、胰岛素、蛋白、核酸、肝素等生物样品的分离和纯化。选好离子交换层析填料后,在实际的使用中还需要注意以下几个方面:
1、上样前需将样品置换到平衡缓冲液中,在样品体积相对柱体积来说较大时,这一点尤其重要;
2、柱子载量和要达到的分辨率决定上样量。如果想达到较好的分辨率,建议上样量为柱子载量的30%;
3、实际载量受样品大小和形状的影响,同时填料孔径,流速,样品浓度,pH/蛋白带电性、离子强度等均会影响载量;
4、添加合适的去垢剂:添加离子型去垢剂时,应避免加入的去垢剂与填料配基结合而影响填料的结合载量。
确定离子交换方式:
样品一般在中性pH值的环境中保持较好的活性,在进行离子交换层析时,所用buffer的pH值需偏离样品等电点1个pH值以上。在交换方式的确定环节,常规选择目标物质结合到离子交换层析填料上,而杂质流穿的模式,洗脱时收集目标物。但也可以选择目标物质为不结合填料的流穿模式,使杂质结合到填料上,同样可以达到目标物质与杂质分离的目的。
所用bufferpH值高于样品等电点时,样品带负电,一般用阴离子交换的方式进行物质的分离;所用buffer的pH值低于样品的等电点时,样品带正电,一般用阳离子交换的方式进行物质的分离。
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