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戴安高效液相色谱仪(HPLC)的操作流程涉及多个步骤,从仪器准备到样品分析再到仪器维护,每个步骤都至关重要。以下是基于多个来源的综合操作流程:一、仪器准备
1.检查电源:接通电源,检查插座上各插孔的指示灯是否显示正常。
2.准备流动相:准备好超声处理过的流动相和流路冲洗溶剂。确保流动相经过0.45µm滤膜过滤,并用超声脱气15分钟。
3.更换溶剂:根据实验需要,更换A、B、C、D管路中的溶剂。一般A路放甲醇,B路为纯化水,C路放5%甲醇水用于清洗进样针,D路放流动相。
二、开机与自检
1.开启仪器:依次接通输液泵、柱温箱电源,待各部分自检完毕再接通打印机和计算机的电源。对于双三元梯度系统,还需检查泵头的运行情况。
2.开启工作站:打开电脑,双击电脑桌面上仪器图标,显示工作站主界面。
三、系统平衡与参数设置
1.脱气操作:在工作站主界面上进行脱气操作,确保流动相中无气泡。
2.设定泵参数:在P680型输液泵操作面板上设定z高压力、z低压力和流量,并用适宜溶剂进行冲洗泵的操作。
3.设定柱温:在柱温箱的操作面板上设置所需温度,并等待温度稳定。
4.开灯与采集基线:开启紫外检测器的灯,等待10分钟后选择所需波长,并采集基线直至基线平衡。
四、建立方法与序列
1.建立方法文件:在色谱工作站中创建新的方法文件,设置流动相梯度、流速、检测波长等参数。
2.建立样品表:使用向导创建新的样品表,设置样品名称、样品数、进样量等信息,并选择合适的程序和方法文件。
五、样品分析
1.进样:将手动进样器搬动到Load位置,用0.45µm滤膜过滤后的样品溶液进行进样,然后搬动进样器手柄于Inject位置开始进样。
2.运行序列:在色谱工作站中运行编辑好的序列,开始采集数据。
六、数据处理与报告
1.定量分析:在样品序列表中输入相应的取样量和稀释因子,进行定量分析,设置z小峰面积、积分时间等参数。
2.报告输出:根据需要修改报告格式,并打印输出分析结果。
七、仪器维护与清洁
1.清洗:使用适当的溶剂冲洗色谱柱、手动进样器、进样针等部件,确保冲洗干净。
2.维护:定期检查泵头运行情况,防止结晶堵塞;观察检测器柱温箱运行情况,有异常及时上报。
3.记录:登记仪器使用记录和操作记录。
注意事项
在整个操作过程中,应严格遵守实验室安全规定,佩戴好个人防护装备。
定期检查仪器各部件的性能和状态,确保仪器处于良好的工作状态。
在进行任何操作之前,应仔细阅读仪器使用说明书和相关操作规程。
以上操作流程仅供参考,具体操作可能因仪器型号和实验要求而有所不同。在实际操作中,应根据具体情况进行调整。
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